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| 소개글 |
제한효소를 통한 DNA 분해와 전기 영동 |
| 요약 |
<제한효소를 통한 DNA 분해와 전기 영동>
1. 실험 제목
이번 실험에서는 8주차 실험에서 추출해낸 DNA를 제한 효소를 사용하여 여러 개의 DNA 조각으로 분리한 후, 전기영동을 통하여 원하는 DNA 분자가 유입되었는지를 확인한다.
2. 배경 이론
<효소><공급원><인식 서열><잘린 모습> <5'GAATTC 3'CTTAAG><5'---G AATTC---3' 3'---CTTAA G---5'> <5'CTGCAG 3'GACGTC><5'---CTGCA G---3' 3'---G ACGTC---5'> 이번 실험에는 DNA를 제한 효소로 절단하는 과정이 포함되어 있다. 제한 효소는 원래 세균이 침투한 외래 DNA를 변형 및 파괴시키기 위하여 존재하는 효소이다. 그러나 이 제한 효소는 그 세균의 DNA도 절단할 수도 있기 때문에 그것을 방지하기 위해 세균은 자신의 DNA에 메틸화(methylation)을 하는 등의 방법을 통해 자신의 DNA를 보호한다. 제한 효소는 이중 나선 구조로 된 DNA의 회문식 염기서열, 즉 앞으로 읽으나 뒤로 읽으나 염기서열이 같은 모양을 하고 있는 특징적인 염기서열을 인식하여 절단한다. 잘린 후의 DNA 말단의 모양은 두 종류가 있다. 말단이 엇갈리게 잘린 말단을 점착말단(sticky end)라고 하고, 말단이 일자로 잘린 말단을 평활말단(blunt end)라고 한다. 이 말단의 모양은 두 종류가 서로 다른 성격을 나타내므로 필요한 용도에 맞춰 원하는 말단을 얻을 수 있는 제한 효소를 사용해야 한다. <1> 이번 실험에서 사용하는 제한 효소는 두 종류가 있다. EcoR I 효소와 Pst I 효소를 사용하는데 두 효소 모두 점착식 말단(sticky end)를 형성한다는 공통점이 있지만 인식하는 회문식 염기서열이 다르기 때문에 같은 DNA를 자를 때에도 다른 부위를 자른다. 다음은 그 두 효소의 인식 부위와 절단 후의 모습을 나타낸 |
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