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 [실험보고서] 항생제의 항균활성 및 대장균 형질전환 |
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| 소개글 |
[실험보고서] 항생제의 항균활성 및 대장균 형질전환 |
| 요약 |
1. 실험목적 : 박테리아의 유전형질을 플라스미드를 이용하여 형질전환 시키고 형질전환 된 박테리아를 선택하는 과정을 이해한다.
2. 실험원리 : 외부로부터 주어진 DNA를 받아들여 생물체의 유전적인 성질이 변하는 것을 형질전환(Transformation)이라 한다. 대장균을 포함해서 대부분의 박테리아는 일반적인 조건에서 제한된 양의 DNA만을 도입한다. 효과적으로 형질전환하기 위하여 DNA 도입능력을 강화하는 물리적이거나 화학적인 처리를 거쳐야만 한다. 이러한 처리를 받은 세포를 “competent cell” 이라고 한다. 대장균의 형질전환시 형질전환된 세포를 가려내기 위하여 항생제 저항성 유전자를 가지고 있는 플라스미드 (plasmid)를 사용한다. 형질전환 후 항생제가 포함된 배지에 형질전환 세포를 키우면 이때, 항생제 저항성 플라스미드를 가지고 있는 형질전환체 만이 항생제 저항성 유전자를 발현시킴으로서 항생제가 포함된 배지에서 자랄 수 있다.
3. 실험재료 : 마이크로 피펫, 플라스미드, 페트리접시, spreader, competent cell, ice, water bath, LB배지, 배양기, 항생제, E-tube, 알코올램프
<마이크로 피펫>
액체의 일정량을 가하거나 꺼내는 기구를 말하는데, 유리관의 중앙부에 부풀어진 곳이 있는 단구(單球)피펫과 같이 표선(標線)이 1개만 있어서 일정용적을 취할 수 있게 한 홀피펫과 유리관에 세밀하게 눈금이 있고 유출 도중에도 용적을 볼 수 있게 된 몰피펫으로 나뉜다.
<플라스미드>
세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소(制限酵素)로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다.
효과적으로 형질전환(tran |
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